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    凝膠成像,經典知識剖析(二)
  • 發布日期:2022-04-28     信息來源:      瀏覽次數:611
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下凝膠成像,經典知識剖析(二):

      一. 多種光源可選
      一般的凝膠成像系統,提供 302nmUV、254nmUV、365nmUV、藍光及白光光源。
      ① 安全防護隔離
      觸摸控制電源開關、光源控制、光圈、聚焦等觀察和拍攝工作,實現污染現場和電腦操作現場隔離,防止交叉污染,確保操作者安全,抽屜式樣品載物臺,方便取放樣品。
      ② 直接切膠

      凝膠成像系統也可直接切膠,操作應遵循說明書的指示,尤其注意對激發光源(無論是紫外,光或者藍光)進行相應的防護。


      二. 應用范圍  
      從整體總的來說凝膠成像(系統)可應用于:蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析
      ① 分子量定量
      對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
      ② 密度定量
      一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
      ③ 密度掃描
      在分子生物學和生物工程研究中,我們*常用到的是對蛋白表達產物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統的方法就是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現在實驗室常規配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
      ④ PCR定量
      PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數,密度掃描時并對選擇區域生成縱向掃描曲線圖并積分。


      圖像處理界面

      凝膠成像結果

      三. 注意事項
        1、開關抽屜時防止將EB沾在抽屜或暗箱上,如不慎沾上EB,擦干后用水沖洗;
        2、透射板紫外燈壽命有限,調整圖象后及時成像;
        3.、若長時間不進行操作,機箱總電源將在10分鐘后關閉;
        4、拍攝時,請注意不要將過量的緩沖液傾倒在投射底座上;
        5、凝膠應及時清理,防止凝膠固化后貼附在透射板上,造成成像不清晰;
        6、實驗完畢以后請不要將暗箱式抽屜*關閉,以保證暗箱內空氣暢通;
        7、請勿用該電腦處理文檔等,如需拷貝圖片,請將移動盤格式化后再插入;
        8、請注意保管好軟件加mi狗和軟件光盤,以免遺失。

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關于凝膠成像,經典知識剖析(二)。
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